FastGene Scriptase II - Ready Mix (100 rxns)

Artikelnummer: LS64

FastGene® Scriptase II cDNA Synthesis 5x Ready-Mix (100 rxns)

Enthält alle notwendigen Komponenten zur Durchführung einer reversen Transkription

Der Scriptase II cDNA Synthesis 5x Ready-Mix enthalt keine Oligo dTs. Für den Ready-Mix mit Oligo dTs klicken Sie hier.

 

Applikationen

  • Quantifizierung der Genexpression
  • RT-qPCR
  • Next Generation Sequencing
  • Niedrige RNA Konzentrationen
  • Schwierige Template

 

Ready Mix

Die FastGene® Scriptase II ist eine optimierte reverse Transkriptase mit einer reduzierten RNase H-Aktivität. Der 5x Ready Mix enthält alle notwendigen Komponenten zur Durchführung einer reversen Transkription in nur einem Reaktionsgefäß.

 

Optimiertes Enzym

Die modifizierte reverse Transkriptase ermöglicht die cDNA Synthese auch bei einer sehr geringen RNA Konzentration. Mutationen wurden in die RNase H Domäne der MuLV reversen Transkriptase eingebaut. Die RNA wird während der Erststrang-cDNA-Synthese nicht degradiert, so dass eine höhere Ausbeute an cDNA in der vollen Länge gewonnen wird. Zusätzlich führt die höhere thermische Stabilität der FastGene® Scriptase II zu einer gesteigerten Robustheit des Enzyms. Die FastGene® Scriptase II ist mit ihrer RNase H Domänmutation und ihrer höheren thermalen Stabilität die optimale Wahl für komplexe Anwendungsgebiete, wie RT-qPCR and NGS.

 

Niedrigere RNase H Aktivität für längere cDNA

Die FastGene® Scriptase II hat eine modifizierte RNase H Domäne. Aufgrund dieser wird die RNA nicht degradiert und dient als Templat für längere cDNAs – mit dem Ergebnis von Fragmentgrößen bis zu 12 kBp.

 

Optimierte Enzyme für die qPCR

Die FastGene® Scriptase II liefert ausgezeichnete cDNA Template für Nachfolgeapplikationen, wie z.B. qPCR und NGS. Die in voller Länge vorhandene, resultierende cDNA spiegelt ein kompletes Bild des zugrundeliegenden Gens wieder und ist in der Lage Modifikationen, wie z.B. Splicing Varianten, zu zeigen.

Ready-to-use

Der FastGene® Scriptase II 5x ReadyMix enthält alle notwendigen Komponenten für eine reverse Transkription:

 

  • FastGene® Scriptase II
  • 5x FastGene® Scriptase II Puffer
  • dNTPs
  • RNase Inhibitor
  • Random Hexamer
  • Helferprotein

1. Vermischen Sie den ReadyMix mit dem RNA-Template unter Verwendung des folgenden Pipettierschemas:

5x FastGene® Scriptase II ReadyMix (LS64)4 µl
RNA-template*x µl
Steriles Wasserauf 20 µl auffüllen

*Die Konzentration der Template-RNA kann bis zu 2,5 μg betragen

 

2. Inkubation für 10 Minuten bei 25 °C.

3. Inkubation für 60 Minuten bei 42 °C*.

*Hinweis: Die empfohlene Inkubationszeit kann je nach Konzentration auf 5 Minuten reduziert werden. Schauen Sie sich hierzu unsere „Technical Note“ an.

 

 

4. Inaktivierung der FastGene® Scriptase II durch Inkubation bei 85°C für 5 Minuten.

5. Lagerung der cDNA bei -20 °C oder direkte Verwendung für nachfolgende Anwendungen.

on 16.07.2019

Wir haben das Produkt ausprobiert und wir waren mehr als zufrieden damit! Wir haben verschiedene qPCRs durchgeführt mit zwei unterschiedlichen Kontrollen (GAPDH und Tubulin-b), sowohl für Zellinien, als auch für Patienten Proben (Biobank tiefgefrorenen Biopsiegewebe), und die Ergebnisse, waren ganz gut! Die Kontrollwerte sind stabil geblieben im Vergleich zu unserem alten cDNA Protokoll und sogar mit weniger RNA als früher. Anwendung und Protokoll fanden wir ebenso super easy!

Translation by Nippon Genetics:

We use the Sciptase II Ready Mix and we were more than happy with it! We performed different qPCRs with two different controls (GAPDH and tubulin-b), for both cell lines and patient samples (Biobank frozen biopsy tissue). The results were quite good! The control values were stable compared to our old cDNA protocol, even with less RNA than before. The application and the protocol were very easy!
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