FastGene Scriptase II

Transcriptases inverse

FastGene® Scriptase II (20000 unités à  200 U/µL; 100 réactions)

Prix sur demande


Numéro de catalogue LS53

Détails

Enzymes d’ingénierie

Les transcriptases inverses modifiées ont permis la synthèse d’ADNc à partir de très faibles quantités d’ARN. Des mutations sont insérées dans le domaine RNase H de la transcriptase inverse MuLV. Par conséquent, en ne dégradant pas l’ARN pendant la synthèse du premier brin, on obtient un rendement plus élevé en ADNc complet. De plus, une stabilité thermique plus élevée augmente la robustesse de l’enzyme. La FastGene® Scriptase II est exactement l’une de ces enzymes. Avec sa mutation dans le domaine de la RNase H et sa stabilité thermique supérieure, elle constitue le choix optimal pour des applications plus complexes, telles que la RT-qPCR et le NGS.

Applications
  • Quantification de l’expression des gènes
  • RT-qPCR
  • Séquençage de nouvelle génération (NGS)
  • Matrices complexes
  • Concentration faible en ARN
Activité RNase H plus faible pour des ADNc plus longs

FastGene® Scriptase II a un domaine RNase H modifié. L’ARN n’est donc pas dégradé et sert de matrice pour des ADNc plus longs, ce qui permet d’obtenir une taille de fragment pouvant atteindre 12 kpb.

Enzymes d’ingénierie – optimisées pour la qPCR

FastGene® Scriptase II fournit des matrices d’ADNc supérieures pour les applications en aval, par exemple la qPCR et la NGS. L’ADNc complet obtenu donne une image complète du gène et permet de mettre en évidence des modifications (par exemple : variants d’épissage).

Comparaison de différents résultats de PCR
PCR Multiplexe

Fig. 1 : Comparaison de la PCR multiplexe utilisant l’ADNc produit par l’enzyme SS-II du concurrent et la FastGene® Scriptase II à 42 °C et à 50 °C.

qPCR

Fig. 2 : Comparaison des résultats de qPCR en utilisant des amorces pour la GAPDH et l’ADNc produit par l’enzyme SS-II du concurrent et la FastGene® Scriptase II à 42°C, en utilisant différentes concentrations initiales d’ARN.

Fig. 3 : Comparaison des résultats de qPCR en utilisant des amorces pour YWHAZ et l’ADNc produit par l’enzyme SS-II du concurrent et la FastGene® Scriptase II à 42°C, en utilisant différentes concentrations initiales d’ARN.

Documents

LS53_FG-Scriptase-II_TDS_vers.-2020
Application Note

FAQ

L’étape 5 min 65 °C du protocole n’est pas mentionnée dans le manuel de Scriptase II ReadyMix. Quel est le but de cette étape et puis-je la sauter si je n’utilise que la seule enzyme Scriptase II ?

L’étape à 65 °C permet d’éviter la structure secondaire des molécules d’ARN. L’ARN est une molécule simple brin qui forme une structure en épingle à cheveux avec elle-même pour atteindre une meilleure stabilité. Cette étape est en quelque sorte une étape de sécurité, mais dans de nombreux cas, elle n’est pas nécessaire. Vous pouvez donc l’éliminer si vous obtenez de bons résultats dans les deux cas.


 

Quelle est la plage de température optimale pour Scriptase Basic et Scriptase II ?

La plage de température optimale pour les Scriptases est comprise entre 42 °C et 50 °C. Une température supérieure à 50 °C n’est pas recommandée.

4 avis pour FastGene Scriptase II

  1. Haruko Hayasaka Immunohole Functional Laboratory, Department of Bioscience and Biotechnology, Kinki University

    I especially like that the Scriptase II lead to stable results. As a result of performing RT-PCR using tumor derived RNA, we were able to detect the expression of genes whose amplification was unstable with other RT reagents. The Amplification of full-length cDNA has also been confirmed. I would love to also try the 5x Ready Mix.

  2. Ryo Mameda, Department of Biomolecular, Graduate School of Engineering, Tohoku University, Japan

    PCR amplified DNA fragement was cloned into a vector and the sequence was confirmed. As a result, there was no artificial mutation such as changes of single nucleotides.

    Also, the manual of your product (FastGene® Scriptase II cDNA Synthesis Kit) was very easy to understand and I felt no stress on the operation. I definitely want to use other products from NIPPON Genetics.

  3. Dr. Catherine Moermans, pneumology department, CHU-ULiège, Liège, Belgium

    “The FastGene® scriptase II cdna synthesis kit appeared to be a reliable method to perform RT-PCR experiments using induced sputum samples which is a difficult specimen matrix. Indeed, it allowed to obtain a good reproducibility and good amplification curve profils. Furthermore, the cost of this product is really cheap compared to what we use to buy.”

    Translation by Nippon Genetics:

    Das FastGene® Scriptase II cDNA Kit zeichnet sich als zuverlässige Methode aus um RT-PCR Experimente mit Proben eines induzierten Suptums durchzuführen. Obwohl dies eine schwere Probenmatrix ist, konnte eine gute Reproduzierbarkeit und ein gutes Amplifikationskurvenprofil gewonnen werden. Zusätzlich sind die Kosten verglichen zu dem zuvor verwendetem Produkt sehr preisgünstig.

  4. Nathalie Renotte, Cellular and Molecular Epigenetics, GIGA Cancer, Liège, Belgium

    “We have tested the RT kit FastGene Scriptase II in comparison with other kits, like Protoscript II (NEB) and Superscipt II (Invitrogen) and we have noted that the results are similar. Additionally, we can make more “runs” for a better price!”

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