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FAQ
Allgemein
Wozu werden FastGene UF-Konzentratoren verwendet?
- Sie werden zur Konzentration, Entsalzung und zum Pufferaustausch von Biomolekülen wie Proteinen, Nukleinsäuren und Viren verwendet.
- Sie können auch zur Klärung von Proben oder zur Entfernung kleiner Verunreinigungen eingesetzt werden.
Welche Größen und MWCOs sind verfügbar?
FastGene® UF Concentrators sind in drei Größen erhältlich – 0,5 mL, 4 mL und 15 mL – jeweils mit drei Molekulargewichtsgrenzen (MWCO): 10 kDa, 30 kDa und 100 kDa.
Welches Membranmaterial wird verwendet?
Alle FastGene® UF Concentrators verwenden eine PES-Membran (Polyethersulfon) mit geringer Bindungsneigung, die sich ideal für Proteine und Nukleinsäuren eignet.
Für welchen pH-Bereich sind die Konzentratoren geeignet?
Die PES-Membran ist mit einem pH-Wert von 1 bis 14 kompatibel und deckt damit die meisten biologischen und chemischen Anwendungen ab.
Kann ich die Konzentratoren wiederverwenden?
Alle FastGene® UF Concentrators sind Einwegprodukte und nicht steril. Eine Wiederverwendung kann die Leistung beeinträchtigen und das Risiko einer Kontamination erhöhen. Eine Wiederverwendung wird nicht empfohlen.
Können die Konzentratoren sterilisiert werden?
Nicht autoklavieren. Zur Reinigung oder begrenzten Sterilisation können Sie das Produkt vor Gebrauch 30 Minuten lang mit 70 %igem Ethanol abspülen. Lassen Sie das Ethanol immer vollständig verdunsten.
Sind die Konzentratoren RNase- oder Endotoxin-frei?
Sie sind nicht als RNase-frei oder endotoxinfrei zertifiziert. Bei Bedarf 2 Stunden lang mit 0,1 %iger DEPC-Lösung bei 37 °C spülen und anschließend gründlich mit ultrareinem Wasser waschen.
Sind die Konzentratoren chemisch kompatibel mit organischen Lösungsmitteln oder starken Reagenzien?
Die Konzentratoren sind für wässrige und biologische Lösungen vorgesehen.
Überprüfen Sie die Tabelle zur chemischen Verträglichkeit (siehe Benutzerhandbuch oder Liste unten), bevor Sie Säuren, Basen oder Lösungsmittel verwenden.
| Kategorie |
Chemikalie / Reagenz |
Max. Konzentration |
|
Kategorie |
Chemikalie / Reagenz |
Max. Konzentration |
| Säure |
Sulfaminsäure |
≤3 % |
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Organische Lösungsmittel |
Benzol |
Nicht empfohlen |
|
Ameisensäure |
≤5 % |
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Aceton |
Nicht empfohlen |
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Essigsäure |
≤25 % |
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|
Acetonitril |
≤10 % |
|
Salzsäure |
≤1 M |
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|
Toluol |
Nicht empfohlen |
|
Schwefelsäure |
≤3 % |
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|
Formaldehyd |
≤5 % |
|
Salpetersäure |
≤10 % |
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|
DMSO |
≤5 % |
|
Milchsäure |
≤5 % |
|
|
Ethylacetat |
Nicht empfohlen |
|
Phosphorsäure |
≤30 % |
|
|
Pyridin |
Nicht empfohlen |
|
Trifluoressigsäure |
≤10 % |
|
|
Chloroform |
Nicht empfohlen |
|
Trichloressigsäure |
≤10 % |
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|
Tetrachlorkohlenstoff |
Nicht empfohlen |
| Base |
Natriumhydroxid
(4 mL / 15 mL Tubes) |
≤0.5 M |
|
|
Tetrahydrofuran |
Nicht empfohlen |
|
Natriumhydroxid
(0,5 mL Tubes) |
≤0.1 M |
|
Andere Reagenzien |
Phenol |
< 1 % |
|
Ammoniumhydroxid |
≤10 % |
|
|
Glycerol |
≤70 % |
| Alkohol |
Methanol |
≤60 % |
|
|
DTT |
≤0.1 M |
| |
Ethanol |
≤70 % |
|
|
DEPC (Diethylpyrocarbonat) |
≤0.2 % |
| |
Isopropanol |
≤70 % |
|
|
PEG (Polyethylenglykol) |
≤10 % |
| |
n-Butanol |
≤70 % |
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|
Phosphatpuffer (pH 8,2) |
≤1 M |
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Ammoniumsulfat |
Saturated |
| |
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Imidazol |
≤500 mM |
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Urea |
≤8 M |
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β-Mercaptoethanol |
≤0.01 M |
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|
Tris-Puffer (pH 8.2) |
≤1 M |
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Natriumcarbonat |
≤20 % |
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Guanidinhydrochlorid |
≤6 M |
Verwendung
Kann ich die Konzentratoren bei 4 °C verwenden?
Ja. Eine Zentrifugation bei 4 °C ist möglich, jedoch steigt die Viskosität bei niedrigen Temperaturen, sodass die Zentrifugationszeit um etwa das 1,5-fache der ursprünglichen Dauer verlängert werden muss.
Wie entnehme ich die konzentrierte Probe?
- 0,5 mL Tubes: Verwenden Sie die Reverse-Spin-Methode – drehen Sie den Filter in ein sauberes Sammelröhrchen um und zentrifugieren Sie bei 1.000 × g für 1–2 Minuten.
- 4 mL- und 15 mL Tubes: Sammeln Sie das Konzentrat direkt mit einer Pipette.
Wie kann ich die Proteinausbeute verbessern und Verluste vermeiden?
- Wählen Sie eine MWCO, die etwa einem Drittel des Molekulargewichts des Zielproteins entspricht.
- Vermeiden Sie übermäßige Zentrifugalkraft oder lange Schleuderzeiten.
- Wenn die Probe viskos ist oder zum Verkleben neigt, blockieren Sie die Membran über Nacht mit 10 % Glycerin und spülen Sie sie vor der Verwendung ab.
Können diese Geräte Reinigungsmittel oder Endotoxine entfernen?
- Waschmittel: Nur teilweise; die Effizienz sinkt oberhalb des CMC-Wertes.
- Endotoxine: Nein, da Endotoxine oft >10 kDa groß sind und durch Ultrafiltration nicht wirksam entfernt werden können.
Können FastGene UF-Konzentratoren zur Konzentration von Viren oder Nanopartikeln verwendet werden?
Ja.
- Lentivirus: Verwenden Sie 100 kDa MWCO.
- Adenovirus: Verwenden Sie 50 kDa MWCO.
Sie eignen sich auch für die Konzentration von Nanopartikeln und Exosomen (empfohlen 50–100 kDa).
Welche Zentrifugeneinstellungen soll ich verwenden?
- 0,5 mL: Bis 14,000 × g
- 4 mL: Bis 6,000 × g (3,000 × g for 100 kDa)
- 15 mL: Bis 5,000 × g (3,000 × g for 100 kDa)
Verwenden Sie Schwenkbecher oder Rotoren mit festem Winkel, die mit konischen Standard-Tubes kompatibel sind. Tarieren Sie Ihre Proben immer aus.
Trocknen die Proben während der Zentrifugation aus?
Nein. Die FastGene® UF-Konzentratoren verfügen über ein Totvolumen-Design, das ein vollständiges Austrocknen verhindert und Ihre Probe schützt.
Fehlerbehebung
Mein Protein hat sich während der Konzentration ausgefällt – was soll ich tun?
Bei zu schneller oder zu starker Konzentration kann es zu Ausfällungen kommen. Versuchen Sie Folgendes:
- Reduzierung der Zentrifugalkraft (auf 30–50 % der Empfehlung).
- Umstellung auf einen größeren MWCO (z. B. 30 kDa statt 10 kDa).
- Vorsichtiges Mischen der Probe zwischen den Zentrifugationsvorgängen.
Warum fehlt mein Zielprotein nach der Zentrifugation?
Mögliche Ursachen:
- Die gewählte MWCO ist zu groß (Ziel überschritten).
- Zentrifugalkraft zu hoch oder Rotor nicht kalibriert.
- Protein während des Schleuderns ausgefällt. Filtrat und Konzentrat überprüfen; wenn sich Protein im Filtrat befindet, eine kleinere MWCO verwenden.
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