FastGene Scriptase II cDNA 5x ReadyMix

ReadyMix inkl. Random Hexamers

  • Enthält alle notwendigen Komponenten zur Durchführung einer reversen Transkription.
  • Der FastGene® Scriptase II cDNA 5x ReadyMix enthalt keine Oligo dTs. Für den ReadyMix mit Oligo dTs klicken Sie hier (LS65).
Applikationen
  • Quantifizierung der Genexpression
  • RT-qPCR
  • Next Generation Sequencing
  • Niedrige RNA Konzentrationen
  • Schwierige Template
Preis auf Anfrage


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Art. Nr. LS64 100 Reaktionen
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Details

ReadyMix

Die FastGene® Scriptase II ist eine optimierte reverse Transkriptase mit einer reduzierten RNase H-Aktivität. Der 5x ReadyMix enthält alle notwendigen Komponenten zur Durchführung einer reversen Transkription in nur einem Reaktionsgefäß.

Optimiertes Enzym

Die modifizierte reverse Transkriptase ermöglicht die cDNA Synthese auch bei einer sehr geringen RNA Konzentration. Mutationen wurden in die RNase H Domäne der MuLV reversen Transkriptase eingebaut. Die RNA wird während der Erststrang-cDNA-Synthese nicht degradiert, so dass eine höhere Ausbeute an cDNA in der vollen Länge gewonnen wird. Zusätzlich führt die höhere thermische Stabilität der FastGene® Scriptase II zu einer gesteigerten Robustheit des Enzyms. Die FastGene® Scriptase II ist mit ihrer RNase H Domänmutation und ihrer höheren thermalen Stabilität die optimale Wahl für komplexe Anwendungsgebiete, wie RT-qPCR and NGS.

Niedrigere RNase H Aktivität für längere cDNA

Die FastGene® Scriptase II hat eine modifizierte RNase H Domäne. Aufgrund dieser wird die RNA nicht degradiert und dient als Templat für längere cDNAs – mit dem Ergebnis von Fragmentgrößen bis zu 12 kBp.

Optimierte Enzyme für die qPCR

Die FastGene® Scriptase II liefert ausgezeichnete cDNA Template für Nachfolgeapplikationen, wie z.B. qPCR und NGS. Die in voller Länge vorhandene, resultierende cDNA spiegelt ein kompletes Bild des zugrundeliegenden Gens wieder und ist in der Lage Modifikationen, wie z.B. Splicing Varianten, zu zeigen.

Beste Leistung − Produktvergleich

Ein aktueller Trend bei der Entwicklung von RT-Enzymen besteht darin, bei der Durchführung einer reversen Transkription sehr hohen Temperaturen standzuhalten (50+ °C). Unsere FastGene® Scriptase II zeigt jedoch schon bei 42 °C eine viel höhere Leistung. Bei dieser niedrigen Temperatur kann die FastGene® Scriptase II sogar Hochtemperatur-Enzyme übertreffen. FastGene Scriptase II (LS64) - Product comparison

Abbildung: Vergleich der Leistung von FastGene® Scriptase II (cyan) und einer hitzestabilen reversen Transkriptase von Mitbewerber A (orange). FastGene® Scriptase II ReadyMix und die Reverse Transkriptase von Mitbewerber A wurden gemäß den TDS-Empfehlungen für 5 bis 50 Minuten bei 42 °C oder 55 °C inkubiert. FastGene® Scriptase II ReadyMix übertrifft das Hochtemperatur-Enzym bei jedem Gen und zu jedem Zeitpunkt.

Zusammensetzung

Ready-to-use

Der FastGene® Scriptase II 5x ReadyMix enthält alle notwendigen Komponenten für eine reverse Transkription:

  • FastGene® Scriptase II
  • 5x FastGene® Scriptase II Puffer
  • dNTPs
  • RNase Inhibitor
  • Random Hexamer
  • Helferprotein

Protokoll

1. Vermischen Sie den ReadyMix mit dem RNA-Template unter Verwendung des folgenden Pipettierschemas:
5x FastGene® Scriptase II ReadyMix (LS64) 4 µL
RNA-Templat (die Konzentration der Template-RNA kann bis zu 2,5 μg betragen) x µL
Steriles Wasser auf 20 µL auffüllen
2. Inkubation für 10 Minuten bei 25 °C.
3. Inkubation für 60 Minuten bei 42 °C.
  • Hinweis: Die empfohlene Inkubationszeit kann je nach Konzentration auf 5 Minuten reduziert werden. Schauen Sie sich hierzu unsere „Technical Note“ an.
 4. Inaktivierung der FastGene® Scriptase II durch Inkubation bei 85°C für 5 Minuten.
5. Lagerung der cDNA bei -20 °C oder direkte Verwendung für nachfolgende Anwendungen.

Dokumente

Manual

LS64_Scriptase II – Ready Mix_Manual

Technical Note

Very fast reverse transcription reactions (5 min)

Application Note

Cloning of isoflavone biosynthesis related enzyme using RNA extracted from soybene

Comparative study of reverse transcriptase reaction using RNA extracted from zebrafish fertilized eggs

Reverse transcriptase reaction for quantitative expression analysis using RNA extracted from mesenteric adipose rat tissue

Comparative study of RT-reaction by using RNA extracted from mouse lymph node

Comparative study of reverse transcriptase reaction using RNA extracted from peritoneal cells of sterile peritonitis model mouse

MSDS

LS64_FG Scriptase II cDNA 5x Ready Mix_MSDS

1 Bewertung für FastGene Scriptase II cDNA 5x ReadyMix

  1. Tsintari Vasileia, Universitätsklinikum Tübingen, Labor für Experimentelle Hämatologie und Onkologie

    Wir haben das Produkt ausprobiert und wir waren mehr als zufrieden damit! Wir haben verschiedene qPCRs durchgeführt mit zwei unterschiedlichen Kontrollen (GAPDH und Tubulin-b), sowohl für Zellinien, als auch für Patienten Proben (Biobank tiefgefrorenen Biopsiegewebe), und die Ergebnisse, waren ganz gut! Die Kontrollwerte sind stabil geblieben im Vergleich zu unserem alten cDNA Protokoll und sogar mit weniger RNA als früher. Anwendung und Protokoll fanden wir ebenso super easy!

    Translation by Nippon Genetics:

    We use the Sciptase II Ready Mix and we were more than happy with it! We performed different qPCRs with two different controls (GAPDH and tubulin-b), for both cell lines and patient samples (Biobank frozen biopsy tissue). The results were quite good! The control values were stable compared to our old cDNA protocol, even with less RNA than before. The application and the protocol were very easy!

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