ReadyMix Scriptase II ADNc 5X FastGene

Le ReadyMix inclus des hexamères aléatoires

  • Prêt à l’emploi avec tous les ingrédients nécessaires pour effectuer une transcription inverse
  • Le ReadyMix Scriptase II ADNc 5X FastGene® ne contient pas d’Oligo dTs.  Pour la version avec Oligo dTs, cliquez ici (LS65)
Utilisations
  • Quantification de l’expression de gènes
  • RT-qPCR
  • Séquençage NGS
  • Faibles concentrations en ARN
  • Matrices complexes

 

Prix sur demande


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Numéro de catalogue LS64 100 réactions
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Détails

Ready Mix

Le ReadyMix Scriptase II 5X FastGene® est une enzyme génétiquement modifiée avec une activité RNase H réduite. Elle est envoyée prête à l’emploi avec tous les ingrédients nécessaires pour effectuer une transcription inverse.

Enzymes d’ingénierie

Les transcriptases inverses génétiquement modifiées permettent la synthèse d’ADNc à partir de très faibles quantités d’ARN. Des mutations sont insérées dans le domaine RNase H de la transcriptase inverse MuLV. Par conséquent, en ne dégradant pas l’ARN pendant la synthèse du premier brin, un rendement plus élevé en ADNc entier est obtenu. De plus, une stabilité thermique plus élevée augmente la robustesse de l’enzyme.

La Scriptase II FastGene® est exactement l’une de ces enzymes d’ingénierie. Avec sa mutation dans le domaine RNase H et sa stabilité thermique supérieure, elle constitue le choix optimal pour des utilisations plus complexes, telles que des RT-qPCR et du NGS.

Activité RNase H plus faible pour des ADNc plus longs

La Scriptase II FastGene® a un domaine RNase H modifié. L’ARN n’est donc pas dégradé et sert de matrice pour des ADNc plus longs, ce qui permet d’obtenir une taille de fragments pouvant atteindre 12 kpb.

Enzymes d’ingénierie – optimisées pour la qPCR

La Scriptase II FastGene® fournit des matrices ADNc de qualité supérieure pour ses utilisations en aval, par exemple pour de la qPCR et du NGS. L’ADNc entier obtenu donne une image complète du gène et permet de mettre en évidence des modifications, comme des variants d’épissage.

Meilleures performances – Comparaison des produits

Une tendance actuelle dans l’ingénierie des enzymes RT consiste à résister à des températures très élevées lors de la transcription inverse (50+ °C). Cependant, notre Scriptase II FastGene® affiche des performances bien supérieures même à 42 °C. À cette basse température, la Scriptase II FastGene® peut surpasser même les enzymes à haute température.

Consultez les données de comparaison avec le concurrent A, qui ont été réalisées à 55 °C :

FastGene Scriptase II (LS64) - Product comparison

Figure : Comparaison de la performance de la Scriptase II FastGene® (cyan) et d’une transcriptase inverse thermostable du concurrent A (orange). Le ReadyMix Scriptase II FastGene® et la transcriptase inverse du concurrent A ont été incubés pendant 5 à 50 minutes à 42 °C ou 55 °C, conformément aux recommandations de la TDS. Le ReadyMix Scriptase II FastGene® surpasse l’enzyme à haute température pour chaque gène et et à chaque relevé de temps.

Composition

Prêt à l’emploi

Le ReadyMix Scriptase II ADNc 5X FastGene® est livré avec tous les ingrédients nécessaires pour effectuer une transcription inverse :

  • Scriptase II FastGene®
  • Tampon Scriptase II 5x FastGene®
  • Mélange de dNTPs
  • Inhibiteur de RNase
  • Hexamères aléatoires
  • Protéine auxiliaire (helper protein)

Protocole

1. Mélangez le ReadyMix avec la matrice ARN en suivant la configuration suivante :
ReadyMix Scriptase II 5x FastGene® (LS64) 4 µL
Matrice ARN haute qualité (la concentration de la matrice ARN peut monter à 2,5 μg) x µL
Eau stérile jusqu’à 20 µL
2. Incuber à 25 °C pendant 10 minutes.
3. Incuber à 42 °C pendant 60 minutes.
  • Note : Le temps d’incubation recommandé peut être réduit de 5 minutes, en fonction de la quantité et de la taille du produit. Télécharger ici notre Note Technique montrant la performance avec un temps d’incubation plus court.
4. Inactiver la Scriptase II FastGene® en incubant à 85 °C pendant 5 min.
5. Stocker l’ADNc à -20 °C ou l’utiliser pour des utilisations ultérieures.

Documents

Manuel

LS64_Scriptase II – Ready Mix_Manuel

Retour client sur le produit

Cloning of isoflavone biosynthesis related enzyme using RNA extracted from soybene

Note Technique

Réaction de transcription inverse très rapide (5 min)

FAQ

Quelle est la température recommandée pour le ReadyMix ?

Le ReadyMix Scriptase II ne peut être utilisé qu’à 42 °C, car il contient une protéine auxiliaire (helper protein).

Est-ce que je peux utiliser le ReadyMix Scriptase II pendant 15 min avec une grosse quantité d’ARN (2,5 µg / 20 µL) ?

Nous recommandons un maximum d’1 µg. La raison : les gènes très exprimés seront proportionnellement surreprésentés dans une concentration aussi élevée. Signifiant qu’en 15 min, les chances de trouver un ARNm très concentré sont plus hautes que pour les ARNm à faible concentration. Avec 1 µg, la quantité d’enzyme par ARNm sera bien plus haute, garantissant la RT totale de chaque ARNm.

1 avis pour ReadyMix Scriptase II ADNc 5X FastGene

  1. Tsintari Vasileia, Universitätsklinikum Tübingen, Labor für Experimentelle Hämatologie und Onkologie

    Wir haben das Produkt ausprobiert und wir waren mehr als zufrieden damit! Wir haben verschiedene qPCRs durchgeführt mit zwei unterschiedlichen Kontrollen (GAPDH und Tubulin-b), sowohl für Zellinien, als auch für Patienten Proben (Biobank tiefgefrorenen Biopsiegewebe), und die Ergebnisse, waren ganz gut! Die Kontrollwerte sind stabil geblieben im Vergleich zu unserem alten cDNA Protokoll und sogar mit weniger RNA als früher. Anwendung und Protokoll fanden wir ebenso super easy!

    Translation by Nippon Genetics:

    We use the Sciptase II Ready Mix and we were more than happy with it! We performed different qPCRs with two different controls (GAPDH and tubulin-b), for both cell lines and patient samples (Biobank frozen biopsy tissue). The results were quite good! The control values were stable compared to our old cDNA protocol, even with less RNA than before. The application and the protocol were very easy!

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