Details
BlueEasy Prestained Protein Ladder
Der BlueEasy Prestained Protein Marker ist ein dreifarbiger Protein Marker mit 10 verschiedenen Proteinbanden. Die Proteinbanden erstrecken sich über einen besonders großen Molekulargewichtsbereich von 6,5 – 270 kDa. Der BlueEasy Prestained Protein Marker eignet sich besonders zur Beobachtung der Proteinauftrennung während der SDS-PAGE, zum Nachweis der Western-Blot Transfereffektivität bei verschiedenen Membranen (PVDF, Nylon oder Nitrocellulose) und für die Abschätzung des Molekulargewichts von Proteinen.
Abbildung 1: Molekulargewicht der Markerbanden bei Verwendung verschiedener Puffersysteme.
Das Molekulargewicht der Markerbanden kann je nach verwendetem Gel-/ Puffersystem variieren. Grund dafür sind Faktoren des Gel-/ Puffersystems, die das Laufverhalten von Proteinen beeinflussen, wie z.B., Migrationsrate, Gelzusammensetzung, pH-Wert (weitere Informationen siehe FAQ).
- Umfassender Größenbereich: 6,5 – 270 kDa
- 10 Banden mit drei Farben (blau, orange und grün)
- Ready-to-use: Integrierter Ladepuffer für eine direkte Beladung des Gels
- Referenzbanden bei 52 (grün), 30 und 270 kDa (orange)
- Scharfe Banden
Inhaltsstoffe
Pro Bande sind etwa 0,1 – 0,4 mg/mL Protein in Pufferlösung enthalten. Die Pufferlösung ist wie folgt zusammengesetzt: 62,5 mM Trisphosphat, pH 7,5 bei 25 °C, 2 % SDS, 10 mM Dithiothreitol, 1 mM EDTA, und 33 % (v/v) Glycerol
Lagerung
Bei 25 °C bis zu zwei Wochen, bei 4 °C bis zu drei Monaten und bei – 20 °C für längere Zeit lagerfähig.
Beladung:
Für eine gute Visualisierung der voranschreitenden Elektrophorese werden 3 µL – 5 µL des DNA Markers benötigt.
FAQ
Warum werden bei den Proteinmarkern die Molekulargewichte der Markerbanden für verschiedene Systeme getrennt angegeben?
Es gibt verschiedene Faktoren der Gel- und Pufferchemie, die einen Einfluss auf das Laufverhalten von Proteinen haben. Die wichtigsten sind:
- Migrationsrate: Die Migration von Proteinen in der Elektrophorese wird durch die Eigenschaften des Puffersystems beeinflusst, z. B. durch die Ionenstärke, den pH-Wert und das Vorhandensein bestimmter Ionen. Die verschiedenen Puffersysteme beeinflussen die elektrophoretische Mobilität von Proteinen unterschiedlich. Zum Beispiel können Proteine in einem Puffersystem schneller oder langsamer wandern als in einem anderen, was zu offensichtlichen Unterschieden in ihrem Molekulargewicht führt.
- Gel-Zusammensetzung: Die Art des Polyacrylamidgels und seine Porengröße können die Migration der Proteine beeinflussen. Verschiedene Puffersysteme können für unterschiedliche Geltypen optimiert sein, was sich darauf auswirkt, wie sich die Proteine durch die Gelmatrix bewegen. Diese Unterschiede können zu Abweichungen bei den beobachteten Molekulargewichten führen.
- pH-Wert: Der pH-Wert des Elektrophoresepuffers kann sich auch auf die Ladung und Konformation der Proteine auswirken, was wiederum ihre Wanderung im Gel beeinflusst. Verschiedene Puffersysteme können unterschiedliche pH-Werte haben, was zu Schwankungen bei der Schätzung des Molekulargewichts führt.
Tris-Glycin-Gele enthalten eine sich bewegende Front aus Cl- Ionen (von der Tris-HCl im Gel) und negativ geladenen Glycin-Ionen aus dem Laufpuffer. Die Glycin-Ionen bewegen sich langsamer als die Chlorid-Ionen durch das Sammelgel mit niedrigem pH-Wert (pH 6,8) und bilden eine schmale Zone, in der die Proteine konzentriert sind. Wenn die sich bewegende Front auf das Trenngel mit dem höheren pH-Wert (pH 8,8) trifft, bewegen sich die Glycin-Ionen schnell an den Chlorid-Ionen vorbei und ziehen dabei sozusagen die Proteine mit durch das Gel. Aufgrund dieser Zusammensetzung arbeiten Tris-Glycin-Gele im stark alkalischen Bereich und erreichen beim Laufen einen pH-Wert von bis zu 9,5.
Bis-Tris-Gele hingegen sind sauer und verwenden Chlorid als führendes Ion und entweder MOPS (3-[N-Morpholino]propansulfonsäure) oder MES (2-[N-Morpholino]ethansulfonsäure) als nachfolgendes Ion. MOPS wird für mittelgroße Proteine verwendet, während MES kleinere Proteine auflöst. Daher funktionieren Bis-Tris Gele bei neutralem pH.
Nur angemeldete Kunden können eine Bewertung abgeben.
Bewertungen
Es gibt noch keine Bewertungen.