Details
BlueStar Prestained Protein Marker
Der BlueStar Prestained Protein Marker ist ein dreifarbiger Protein Marker mit 10 verschiedenen Proteinbanden. Die Proteinbanden erstrecken sich über einen großen Molekulargewichtsbereich von 10 – 180 kDa. Der BlueStar Prestained Protein Marker eignet sich zur Beobachtung der Proteinauftrennung während der SDS-PAGE, zum Nachweis der Western-Blot Transfereffektivität bei verschiedenen Membranen (PVDF, Nylon oder Nitrocellulose) und für die Abschätzung des Molekulargewichts von Proteinen. Der Marker wird bereits in einem Ladepuffer geliefert und ist somit direkt gebrauchsfertig.
Abbildung 1: Molekulargewicht der Markerbanden bei Verwendung verschiedener Puffersysteme.
Das Molekulargewicht der Markerbanden kann je nach verwendetem Gel-/ Puffersystem variieren. Grund dafür sind Faktoren des Gel-/ Puffersystems, die das Laufverhalten von Proteinen beeinflussen, wie z.B., Migrationsrate, Gelzusammensetzung, pH-Wert (weitere Informationen siehe FAQs).
- Umfassender Größenbereich: 10 – 180 kDa
- 10 Banden mit 3 Farben (blau, orange und grün)
- Ready-to-use: Integrierter Ladepuffer für eine direkte Beladung des Gels
- Referenzbanden bei 28 kDa (grün) und 75 kDa (orange)
- Scharfe Banden
Lagerpuffer
20 mM Dinatriumhydrogenphosphat pH 8,0 (bei 25 °C ), 2 % SDS, 0,2 % Triton X-100, 10 mM 2-Mercaptoethanol, 6 M Urea und 27 % (v/v) Glycerol
Lagerung
Bei -20 °C 12 Monate verwendbar.
Bei +4 °C 3 Monate verwendbar.
Empfehlung für die Beladung
- Tauen Sie den Marker entweder bei Raumtemperatur oder bei 37 – 40 °C für einige Minuten auf um präzipitierte Partikel zu lösen. Nicht kochen!
- Mischen Sie die Lösung gründlich um die Homogenität des Markers sicherzustellen.
- Beladen Sie das SDS-Polyacrylamidgel mit den folgenden Volumen des Markers:
- 5 µl pro Tasche für Minigele, 3 µl für Blots
- 10 µl pro Tasche für große Gele, 6 µl für Blots
FAQ
Warum werden bei den Proteinmarkern die Molekulargewichte der Markerbanden für verschiedene Systeme getrennt angegeben?
Es gibt verschiedene Faktoren der Gel- und Pufferchemie, die einen Einfluss auf das Laufverhalten von Proteinen haben. Die wichtigsten sind:
- Migrationsrate: Die Migration von Proteinen in der Elektrophorese wird durch die Eigenschaften des Puffersystems beeinflusst, z. B. durch die Ionenstärke, den pH-Wert und das Vorhandensein bestimmter Ionen. Die verschiedenen Puffersysteme beeinflussen die elektrophoretische Mobilität von Proteinen unterschiedlich. Zum Beispiel können Proteine in einem Puffersystem schneller oder langsamer wandern als in einem anderen, was zu offensichtlichen Unterschieden in ihrem Molekulargewicht führt.
- Gel-Zusammensetzung: Die Art des Polyacrylamidgels und seine Porengröße können die Migration der Proteine beeinflussen. Verschiedene Puffersysteme können für unterschiedliche Geltypen optimiert sein, was sich darauf auswirkt, wie sich die Proteine durch die Gelmatrix bewegen. Diese Unterschiede können zu Abweichungen bei den beobachteten Molekulargewichten führen.
- pH-Wert: Der pH-Wert des Elektrophoresepuffers kann sich auch auf die Ladung und Konformation der Proteine auswirken, was wiederum ihre Wanderung im Gel beeinflusst. Verschiedene Puffersysteme können unterschiedliche pH-Werte haben, was zu Schwankungen bei der Schätzung des Molekulargewichts führt.
Tris-Glycin-Gele enthalten eine sich bewegende Front aus Cl- Ionen (von der Tris-HCl im Gel) und negativ geladenen Glycin-Ionen aus dem Laufpuffer. Die Glycin-Ionen bewegen sich langsamer als die Chlorid-Ionen durch das Sammelgel mit niedrigem pH-Wert (pH 6,8) und bilden eine schmale Zone, in der die Proteine konzentriert sind. Wenn die sich bewegende Front auf das Trenngel mit dem höheren pH-Wert (pH 8,8) trifft, bewegen sich die Glycin-Ionen schnell an den Chlorid-Ionen vorbei und ziehen dabei sozusagen die Proteine mit durch das Gel. Aufgrund dieser Zusammensetzung arbeiten Tris-Glycin-Gele im stark alkalischen Bereich und erreichen beim Laufen einen pH-Wert von bis zu 9,5.
Bis-Tris-Gele hingegen sind sauer und verwenden Chlorid als führendes Ion und entweder MOPS (3-[N-Morpholino]propansulfonsäure) oder MES (2-[N-Morpholino]ethansulfonsäure) als nachfolgendes Ion. MOPS wird für mittelgroße Proteine verwendet, während MES kleinere Proteine auflöst. Daher funktionieren Bis-Tris Gele bei neutralem pH.
Nur angemeldete Kunden können eine Bewertung abgeben.
Norbert Zanker, Pharmakologie und Toxikologie, Universität Ulm –
Very good product. The range of the protein ladder is for our purposes perfect.
Nicely visible protein ladder.
We use it as our standard protein ladder for gel electrophoresis.
Translation by Nippon Genetics:
Sehr gutes Produkt. Der Bereich der Protein Ladder ist für unsere Zwecke perfekt. Eine gut sichtbare Protein Ladder. Wir nutzen diesen Protein Marker als unseren Standard für die Gelelektrophorese.
Verifizierter Benutzer
PhD Marina Cotsiki, Molecular Oncology Laboratory, BSRC Alexander Fleming, Greece –
We have been using Nippon Genetics protein markers in our laboratory for the past 7 years. They are easy to use and exceptionally cost-efficient. The range of the molecular weights is very broad so we can use them for all of our SDS-polyacrylamide gel applications. The bands are sharp and focused and very easily identifiable by the reference colors. Overall, we are extremely satisfied with the quality of these markers.
Translation by Nippon Genetics:
Wir benutzen die Protein Marker von Nippon Genetics seit 7 Jahren in unserem Labor. Sie sind leicht anzuwenden und besonders preisgünstig. Der Molekulargrößenbereich ist sehr umfassend, so dass wir die Marker für alle unsere SDS-Polyacrylamidgelapplikationen benutzen können. Die Banden sind scharf, klar und durch die Referenzfarbbanden sehr einfach identifizierbar. Insgesamt sind wir sehr zufrieden mit der Qualität dieser Marker.
Verifizierter Benutzer